相较于感情淡漠、后来更是势不两立的父亲，伊丽莎白与伯父的感情更加深厚，她是有据可查的见证了亚瑟一世去世场景的人物之一。在亚瑟一世执政的最后十年，他不再干涉欧洲大陆的纷争，而是将注意力放在国内，他建立了完善的报驿系统以向天主教势力较为薄弱的农村地区渗透，并于1531年通过了《公祈法案》将廉洁教会、民族教会等具有新教色彩的原则正式确立。
伊丽莎白一世见证了法案的颁布，据说她甚至负责了一部分内容的起草，参与此事的神学家都感叹公主的博学与聪敏不亚于一位枢机主教，而她对宗教教义冷酷现实的态度也深得亚瑟一世的赞赏，侄女的陪伴在很大程度上缓解了亚瑟一世晚年的孤寂，他曾反省了自己早年对儿女的教育疏忽，但伊丽莎白公主称亚瑟一世是“她所能想到的最好的父亲”。
因为母亲的撮合，伊丽莎白公主同时和身在布列塔尼的勒妮公主一家保持密切联系，她非常清楚前威尔士亲王及其后代在继承权上对她有天然的压制。勒妮公主治下的布列塔尼是当时欧洲的科学文化中心，她赞助了大量人文主义者并支持科学实验，这部分人才后期大多进入伊丽莎白一世的宫廷和行政系统，他们曾被怀疑是勒妮公主的间谍，但受到了伊丽莎白一世的保护，“他们能制造出火/枪和药品，但你们不行”。
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三月的王储
1536年亚瑟一世去世前，伊丽莎白公主已经在贵族、官僚和民众间积累了非凡的声望，她拥有自己的封地和独立的幕僚群体，并以才智和魅力将他们紧紧团结在自己身边，而她的父亲错误低估了女儿，以至于认为他可以在成为国王后对她们任意摆弄。
在生下伊丽莎白公主后，安妮夫人曾经怀过一次孕，但在怀孕初期流产，1526年后，她更是与约克公爵长期分居，这确保了伊丽莎白公主的地位至少不会受到同胞兄弟的挑战。对妻女背叛自己而投效兄长的行径，约克公爵早已对她们恨之入骨，因此加冕仪式后，他拒绝承认自己和安妮·博林的婚姻，甚至宣称伊丽莎白公主是她与亚瑟一世的私生女。
此事在英格兰掀起惊涛巨浪，若非安妮夫人在离开巴黎时已经怀孕，她或许真的百口莫辩，母女二人所蒙受的攻讦得到了广泛的同情，身在布列塔尼的勒妮公主甚至写信怒斥亨利八世“别忘了你得知你的夫人怀孕时你有多么惊喜”，但亨利八世是否在巴黎即得知妻子怀孕除却勒妮公主的宣言外并无证据。
尽管无人相信亨利八世的荒谬言论，他仍单方面宣布婚姻无效，并同安妮·博林的表亲凯瑟琳·霍华德结婚，宣布她是英格兰的合法王后，同时责令安妮夫人和伊丽莎白公主立刻进入修道院并发愿为修女。此时针对亨利八世的反对浪潮已经到了无法抑制的地步，从贵族到平民都坚信他是一位比失地王约翰更加无能和荒唐的君主，并急迫地渴望伊丽莎白公主能及时拨乱反正，或者亚瑟一世能死而复生，但伊丽莎白公主仍对父亲表现出极度地恭敬和忠诚，祈求他“多给自己一些安排侍女的时间”，或许是出于对女儿残存的一点父爱，亨利八世答应了她的要求，但他自此再无翻盘余地。
1536年2月，亨利八世在自己的房中忽然中风，以至于不能言语，伊丽莎白公主及时赶到父亲身边，痛哭流涕地为父亲祈祷，但亨利八世的身体状况并无好转迹象。为了证明国王已无履行职能能力，亨利八世被抬入国会，让议员们围观了他的身体状况，因此在议会的请求下，伊丽莎白公主从父亲手中接过王冠和权杖，正式加冕为英格兰女王，此时距亚瑟一世去世仅过去三个月。
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荣光女王
在加冕为英格兰女王后，伊丽莎白一世立刻册封前威尔士亲王和勒妮公主的长子布列塔尼的亚瑟为威尔士亲王，同时参考堂姐玛丽女王的行为，伊丽莎白一世授予母亲“女王的母亲”的称号，安妮夫人自此深度参与英格兰的外交事务，她是欧洲历史上第一位以女性身份担任外交大使的人物。
得益于前任亚瑟一世的经营，伊丽莎白一世在登基后拥有一个较好的外部环境。法兰西，在克洛德王后去世后，弗朗索瓦一世愈加沉湎声色，并在1528年正式迎娶安妮·德·皮塞勒为妻。安妮王后是有名的金发美人，而她的才智野心更甚于美貌，在遇到弗朗索瓦一世后，她迎合了弗朗索瓦一世在连番政治失败后寄情宗教的意愿，令弗朗索瓦一世将她奉为挚爱，但她同时和弗朗索瓦一世的前任情妇、负责监护克洛德王后所生的两位王子的戴安·德·普瓦捷达成了心照不宣的联系，后者一直鼓励两位王子和姨母勒妮公主保持联系以增强政治资本。
两位王子对布列塔尼和新教徒的亲近令弗朗索瓦一世感到警惕，他开始计划续弦以分化两个儿子的政治地位，但在与前匈牙利王后奥地利的玛丽的婚姻谈判失败后，弗朗索瓦一世不再寄希望于等待哈布斯堡家族年幼的公主长大，而是希望在本国选择一位信仰天主教的贵族小姐，看到机会的安妮·德·皮塞勒加紧了对弗朗索瓦一世的攻势，最终在1528年正式加冕为法兰西王后。
安妮王后深知养寇自重之道，因此对于前任留下的两位王子，她并未利用王后身份干预其信仰，而是采取怀柔政策对他们进行鼓励和安抚，国王家庭的和谐在安妮王后于1534年生下一个成活儿子夏尔王子后出现裂痕，盖因两位年长王子日益表现出对父亲的叛逆和怨恨，亨利王子更是与照顾他长大的戴安·德·普瓦捷产生了特殊的情感，令弗朗索瓦一世尤为震怒。
克洛德王后的长子弗朗索瓦王子在1536年骤然去世令法兰西的王室矛盾彻底激化，成为推定继承人的亨利王子公然宣称兄长系被父亲授意毒杀，并向自己的姨母勒妮公主和英格兰女王伊丽莎白一世寻求支持和庇护，气急败坏的弗朗索瓦一世宣布亨利王子犯下叛国罪，并立自己的幼子夏尔王子为继承人，此后十年，法兰西王室的对立为英格兰迎来了较为稳定的大陆环境，而被奥斯曼帝国和国内的新教徒折磨得焦头烂额的查理五世更无法分心关注英格兰的事务。
最大的威胁来源于西班牙，在亚瑟一世去世后，斐迪南三世以伊丽莎白女王并非阿拉贡的凯瑟琳后代为由撕毁了与亚瑟一世签订的北美贸易合约，并试图拉拢勒妮公主和那不勒斯的玛丽女王加入自己的阵营，但前者不屑接受天主教徒的橄榄枝（更无意在自己的长子已成为伊丽莎白一世的继承人后仍然生事），后者则直接回信要求斐迪南三世尊重他姨母的意志。
即便没有争取到盟友，斐迪南三世仍然贯彻了对英格兰航线的骚扰政策，企图通过打击英格兰的贸易收入削弱其在远洋的竞争力。1545年，伊丽莎白一世正式向西班牙宣战，派遣舰队远征西班牙，伊丽莎白一世一向以稳重冷静的性格闻名，但舰队出发前，她心神不宁、坐立难安，只能在母亲和宠臣的怀抱中寻求安慰。
但女王的紧张被证明是不必要的，借助女王的缜密布置和更胜一筹的武器火力，英格兰海军大获全胜，覆灭三分之二的西班牙王室舰队再也无力与英格兰在海上争锋，此后数个世纪，英格兰在大西洋的霸权都不可撼动，对自己和堂姐的功绩，伊丽莎白一世曾自豪地宣称：“地中海属于她，大西洋属于我。”欧洲终将匍匐在这对姐妹的裙摆下。
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